DOG1蛋白在直肠癌中的表达及其意义

[摘要]　目的　观察DOG1蛋白在直肠癌中的表达，探讨其临床其意义。　方法　选取30例确诊为直肠癌且以全直肠系膜切除原则行直肠癌根治术的患者，取肿瘤组织及瘤旁间质组织进行常规包埋切片，行免疫组织化学染色，进行DOG1、CD117检测，观察分析检测结果，同时对DOG1阳性表达与患者年龄、性别、肿瘤直径、细胞核异形性等的关系进行分析，随访患者3年，观察DOG1阳性表达与患者生存率的关系。　结果　肿瘤组织中DOG1蛋白多呈弥漫性表达，肿瘤组织DOG1阳性表达率为23.33%，瘤旁间质组织DOG1阳性表达率为10.00%，肿瘤组织DOG1阳性表达率明显高于瘤旁间质组织，差异有统计学意义（P　<　0.05）；肿瘤组织CD117阳性表达率为80.00%，瘤旁间质组织DOG1阳性表达率为33.33%，肿瘤组织CD117阳性表达率明显高于瘤旁间质组织，差异有统计学意义（P　<　0.05）；DOG1蛋白阳性表达与肿瘤细胞丰富程度及细胞核异形性有关，差异有统计学意义（P　<　0.05）；DOG1表达阳性者1年生存率与表达阴性者差异无统计学意义（P　＞　0.05），但3年生存率明显低于DOG1表达阴性者，差异有统计学意义（P　<　0.05）。　结论　DOG1蛋白在直肠癌患者肿瘤组织中表达高于瘤旁间质组织，且阳性表达率与肿瘤细胞丰富程度及核异形性程度有关，而且其阳性表达与患者预后有关，临床应引起重视。

[关键词]　直肠癌；DOG1蛋白；胃肠道间质瘤

[中图分类号]　R735.3　[文献标识码]　A　[文章编号]　1673-7210（2012）12（c）-0016-03

DOG1是一种新近发现的基于基因表达谱在胃肠道间质瘤（GISTs）中高表达的基因，有研究显示，在胃肠道间质瘤中DOG1表达阳性率为87.0%～97.8%[1]。而有近年来有研究表明，在其他软组织恶性肿瘤中也检测到DOG1的表达[2]。本文通过对30例直肠癌患者采用免疫织化学方法检测其DOG1的表达，以探讨DOG1蛋白在直肠癌患者肿瘤组织中的表达情况及其临床意义，现报道如下：

1　资料与方法

1.1　一般资料

选择我院2005年1月～2008年1月收治的直肠癌患者30例，其中男19例，女11例；年龄40～70岁，平均（56.5±12.9）岁；所有患者均以全直肠系膜切除原则行直肠癌根治术，术前均未接受任何放疗或化疗，术后病理证实为腺癌。

1.2　方法

取肿瘤组织及瘤旁间质组织标本，常规进行石蜡包埋，进行连续切片，厚度为3　μm，采用免疫组织化学染色进行DOG1、CD117检测。常规脱蜡，酒精梯度脱水，采用3%的过氧化氢灭活内源性氧化酶，滴加一抗，置于4℃冰箱内过夜，按照试剂盒说明书进行余下操作（试剂盒购自丹麦DAKO公司）[3]。采用兔抗人DOG1单克隆一抗（1∶50），CD117（1∶200）为第一单抗，购自美国Spring公司。

1.3　结果判定

两名病理医师在双盲情况下进行结果判定，DOG1表达到肿瘤细胞的细胞膜及细胞质，根据染色强度进行评分。0分：阴性表达；1分：染色模糊不清；2分：中等强度染色，呈局灶性或弥漫性；3分：强烈的过多整膜阳性，呈局灶性或弥漫性。其中0分和1分为阴性，2分和3分为阳性。CD117肿瘤细胞膜及细胞质呈棕黄色为阳性，阳性内对组为肥大细胞。

1.4　统计学方法

采用统计软件SPSS　15.0对实验数据进行分析，计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，计数资料以率表示，采用χ2检验。以P　<　0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1　肿瘤组织与瘤旁间质组织DOG1蛋白及CD117表达阳性情况

肿瘤组织中DOG1蛋白多呈弥漫性表达，肿瘤组织DOG1阳性表达率为23.33%，瘤旁间质组织DOG1阳性表达率为10.00%，肿瘤组织DOG1阳性表达率明显高于瘤旁间质组织，差异有统计学意义（P　<　0.05）。肿瘤组织CD117阳性表达率为80.00%，瘤旁间质组织CD117阳性表达率为33.33%，肿瘤组织CD117阳性表达率明显高于瘤旁间质组织，差异有统计学意义（P　<　0.05）。见表1。

2.2　DOG1蛋白表达与直肠癌患者一般资料及临床病理指标的关系

DOG1蛋白阳性表达与细胞丰富程度及核异形性有关，差异有统计学意义（P　<　0.05），但与患者年龄、性别及肿瘤直径等无关，差异无统计学意义（P　＞　0.05），见表2。

2.3　DOG1蛋白在直肠癌患者中表达与其预后的关系

随访本组患者3年，DOG1表达阳性者与DOG1表达阴性者1年生存率比较，差异无统计学意义（P　＞　0.05），但3年生存率二者比较，DOG1表达阳性者明显低于DOG1表达阴性者，差异有统计学意义（P　<　0.05）。见表3。

3　讨论

胃肠道恶性肿瘤中的1%～3%为间质瘤，其中胃间质瘤占50%～70%，小肠占20%～30%，而结直肠内则较少见[4]。目前关于DOG1在胃肠道间质肿瘤表达的相关研究日益增多，但关于其在直肠癌中的表达相关研究报道较少见。

DOG1基因包含26个外显子，定位于人染色体11q13.3，蛋白分质相对分子量为114　000，具有8个跨膜区段的膜蛋白，是一种钙离子激活的氯离子通道。West等[5]于2004年采用免疫组织化学染色法及原位杂交技术首先检测到了DOG1并进行相关报道，研究结果显示139例胃肠道间质瘤患者中，136例（97.80%）DOG1蛋白表达阳性，而且非胃肠道间质瘤患者中，仅0.9%（4/438）的患者DOG1蛋白表达阳性。Espinosa等[6]对44例胃肠道间质瘤，935例其他类型的间叶源性肿瘤及432例非肉瘤肿瘤进行免疫组织化学染色，结果显示胃肠道间质瘤肿瘤组织中DOG1、CD117及CD34表达阳性率分别为87%、74%、59%；在935例其他类型的间叶源性肿瘤中，仅有2例呈DOG1表达阳性。这些研究结果显示，DOG1蛋白是胃肠道间质瘤敏感性和特异性均较高的一种标志物。

本组研究中，笔者对30例直肠癌患者采用免疫组织化学染色法检测DOG1蛋白，结果显示，肿瘤组织中DOG1表达阳性率为23.33%，而瘤旁间质组织表达阳性率仅为10.00%，这一结果说明肿瘤组织中DOG1蛋白呈高表达。从本组研究结查还可以看出，肿瘤组织中CD117表达阳性率为80.00%，而瘤旁间质组织表达阳性率为33.33%，两组差异有统计学意义（P　＜　0.05）。同时从这组数据中也可以看出，肿瘤组织中DOG1表达阳性率低于CD117。有学者研究显示DOG1对于胃肠道间质瘤具有高度特异性，但是对于除DOG1阳性的其他间质瘤包括子宫腹腕后肌瘤、腹膜平滑肌瘤等组织中表达阳性率却较低[7]，而且DOG1在食管鳞状细胞癌及胃癌中阳性表达率较高，而在大肠癌表达阳性率较低。本组研究结果与文献报道在一定程度上相符。有学者研究结果显示，胃肠道间质瘤DOG1阳性表达率为87%，对其表达与胃肠道间质瘤的临床病理指标包括基因突变类型，肿瘤大小等无关[8-9]，而且与患者年龄也无明显相关。而本组研究结果显示，肿瘤细胞丰富且密集的直肠癌患者肿瘤组织DOG1表达阳性率高于肿瘤细胞欠丰富的肿瘤组织，轻度核异形性与中度核异形性的肿瘤细胞DOG1表达阳性率高于重度者。笔者认为这可能与国内外患者本身特性所决定或者是本组样本较少有关[10-11]。

从本组研究结果可以看出，DOG1蛋白表达阳性者术后3年生存率低于DOG1表达阴性者。目前国内外多项研究报道显示DOG1在胃肠道间质瘤诊断中具有重要的临床价值，由于本组研究有限，对于DOG1蛋白在直肠癌肿瘤组织中的表达及其临床意义的研究尚属于较初步阶段，仍需进一步研究进行探讨和证实[12-13]。

[参考文献]

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[6]　Espinosa　I，Lee　CH，Kim　MK，et　al.　A　novel　monoclonal　antibody　against　DOGI　is　a　sensitive　and　specific　marker　for　gastrointestinal　stromal　tumors　[J].　Am　J　Surg　Pathol，2008，32（2）：210-218.

[7]　钱震，韩军平，李金华，等.DOG1在胃肠间质瘤中表达的临床病理意义[J].现代肿瘤医学，2011，19（11）：2288-2290.

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[9]　方金满，张海涛，李德春，等.胃肠道间质瘤新标记物DOG1应用的初步探讨（附37例报告）[J].中国血液流变学杂志，2010，20（1）：122-123.

[10]　李宝江，姜忠敏，张立东，等.DOG1蛋白在胃肠道间质瘤中的表达意义及其与CD117表达的关系[J].广东医学，2011，32（18）：2434-2436.

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[12]　张秀梅，时磊，王海，等.DOG-1在胃肠道间质瘤中的表达及其临床意义[J].实用癌症杂志，2012，27（5）：465-467.

[13]　李宝江，姜忠敏，张立东，等.DOG1蛋白在胃肠道间质瘤中的表达意义及其与CD117表达的关系[J].广东医学，2011，32（18）：2434-2436.

（收稿日期：2012-08-17　本文编辑：李继翔）

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