在衣康酸产生菌的微波育种

摘 要：衣康酸高产菌经过多代传种，都有不同程度的产量降低。微波育种是一种正变率（所谓正变率就是通过诱变以后，产酸率高于出发菌株的高产菌株所占挑选菌株的百分率）较高的遗传育种方法^[1]。我们做了微波育种试验，试验结果表明，对于恢复衣康酸产生菌的高产量，微波育种是一种很有效的方法。关键词：衣康酸；发酵；微波育种Abstract：Through  many  generations，itaconic acid microbe will degenerate  their product abilities. Referencing related literatures, microwave breeding is a good method which causes positive changes high .We experimented a lot. As shown in the result, to restore itaconic acid microbe abilities, microwave breeding  is a valid method.                                    Key word: Itaconic acid，Fermentation，Microwave breeding 引 言      衣康酸又名甲叉丁二酸，有着广泛的用途。其可以作为合成塑料和橡胶的原料和辅助材料，也可以作为除垢剂，其除垢能力很好，同时衣康酸可作为高级化妆品的原料以及人造宝石材料等。目前，发酵生产衣康酸的原料普遍是蔗糖、葡萄糖、淀粉、糖蜜等。我们尝试了一种新方法，即以蔗汁为原料直接发酵生产衣康酸。这种新方法能大幅度降低生产成本，研究结果表明：取得较高的产酸率和较高的糖转化率。但不管采用何种原料，在菌种保存过程中，由于经过多次传代，衣康酸的产量都有不同程度降低。因此，寻找一种诱变方法，快速地恢复各株的高产量，是我们要解决的问题，其具有一定的应用价值。 1 材料与方法1．1 菌种RH17（23）本实验室筛选得的高产菌株（产酸率达6.83%）1．2 培养基（1）斜面培养基：7%蔗糖、0.4%(NH₄)₂SO₄、0.4%MgSO₄·7H₂O、营养浆（加量1.6ml/1000ml）、用H₂SO₄调pH4.0~4.5、2%琼脂、常规灭菌（2）0.1%LiC1平板培养基:7%蔗糖、0.4%（NH₄）₂SO₄、0.4%MgSO₄·7H₂O、营养浆（加量1.6ml/1000ml）、0.1%LiCl、0.2%的溴甲酚绿（加量50ml/1000ml）、用H₂SO₄调pH4.0~4.5、2%琼脂、常规灭菌（3）摇瓶发酵培养基：（30ml 装液量）10%蔗糖、0.1%MgSO₄·7H₂0、0.25%NH₄NO₃、营养浆（加量4ml/1000ml）、CuSO₄·5H₂O(加量0.004g/1000ml)、用H₂SO₄调pH3.0、常规灭菌1．3 诱变方法：出发菌株斜面℃——斜面活化——取活化斜面用15ml无菌生理盐水洗下孢子——转入无菌的带玻珠的250ml三角瓶中——35℃上摇床振荡活化——转入250ml无菌三角瓶中——10秒微波照射——吸0.5ml进行梯度稀释——取合适梯度涂平板。1．4 筛选：挑平板上透明圈大的单圈落，上摇瓶发酵，测其产酸率，筛选高产菌株。1．5 分析方法^[2] （1）衣康酸定性分析：纸层析法（2）衣康酸定量分析：Friedkin溴化法 2 结果 在平板上挑取20个透明圈大的单菌落，测定其产酸率，数据如表Ⅰ： 表Ⅰ 产酸率测定

菌株         微（1）     微（2）     微（3）    微（4）   微（5）

产酸率       4.32%       4.28%       4.30%      4.35%     4.37%

 

菌株         微（6）     微（7）     微（8）    微（9）   微（10）

产酸率       6.85%       4.12%       6.87%      2.15%     3.25%

 

菌株         微（11）     微（12）     微（13）    微（14）   微（15）

产酸率       4.30%        4.28%        4.35%       4.47%     4.52%

 

菌株         微（16）     微（17）     微（18）    微（19）   微（20）

产酸率       4.48%        4.72%        4.50%       4.62%      4.58%

注：出发菌株RH17（23）产酸率6.83 %，多次传代后的产酸率降到4.26% 采用C₀60和紫外线进行诱变，需挑取约100个单菌落，才可能得到1~2株高产菌株，有时还需多次诱变，采用逐步提高产量的方法，才能恢复菌种的高产量，上述这些方法费时、费力。 3 结论      从以上试验结果可以看出：经过微波育种，挑取20个单菌落，即可筛选得两株高产菌落，分别是微（6）6.85%和微（8）6.87%。因此微波育种是一种正变率很高的育种方法，对于提高衣康酸的高产量，是一种有效遗传育种方法。  参考文献[1]郭峰，等.梅岭霉素产生菌的微波诱变.江西农业大学学报，2004, 26  (4) : 608~610.[2]金其荣.发酵有机酸生产与应用手册.中国轻工业出版社，2000: 459~470.

推荐访问:育种 微波 衣康酸