直肠癌肝转移患者肿瘤组织CD44、CD166阳性表达的临床意义

汇报如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取笔者所在医院2013年1月-2016年12月笔者所在医院收治的146例直肠癌患者的肿瘤组织标本，其中32例为肝转移患者（转移组），另外114例为未转移患者（对照组），纳入所有标本对应患者留取标本前均未进行相关对应治疗，其中转移组（32例）对应患者男女比例（5∶3），年龄35～69岁，平均（58.29±9.46）岁，病程5～40个月，平均（20.63±10.96）个月；原发肿瘤大小：小于2 cm为6例，2～5 cm为11例，大于5 cm为15例；浸润深度：T2 9例，T3 12例，T4 11例；分化程度：低分化腺癌17例，中分化腺癌10例，高分化腺癌5例；肝转移部位：左侧单叶4例，右侧单叶11例，双叶17例；转移灶数量：单个6例，多个26例。对照组（114例）对应患者男女比例（73∶41），年龄36～70岁，平均（56.87±8.92）岁，病程7～40个月，平均（21.47±11.58）个月；原发肿瘤大小：小于2 cm为15例，2～5 cm为32例，大于5 cm为67例；浸润深度：T2 66例，T3 34例，T4 14例；分化程度：低分化腺癌63例，中分化腺癌39例，高分化腺癌12例。两组患者性别、年龄、病程及浸润深度等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：（1）诊断明确且临床病历资料完整者；（2）经CT、MRI或术中探查切除标本病理检查确诊者；（3）患者年龄30～70岁者；（4）患者及其家属对本研究知情并同意且签署知情同意书者。

排除标准：（1）合并其他类型肿瘤者；（2）合并其他严重疾病或严重并发症者；（3）恶性肿瘤既往病史者；（4）其他相关禁忌者。

1.3 方法

1.3.1 主要试剂 D44与CD166单抗；聚合物辅助剂；二抗CD44/CD166试剂盒；免疫组化SP染色试剂盒；标记抗山羊辣根酶 IgG多聚体；小牛血清；PBS缓冲液； DAB试剂盒。

1.3.2 实验方法 对所有标本进行厚4 μm连续两张切片，并进行载玻片平铺，65 ℃条件下过夜处理。根据免疫组化SP染色试剂盒操作说明采用SP免疫组化染色法分别对D44与CD166进行检测，采用二甲苯进行脱蜡处理后，采用酒精进行梯度脱水，蒸馏水冲洗完成后采用PBS浸泡5 min。于高压下采用枸橼酸缓冲液进行抗原修复，高压锅喷气3 min，完成后室温下进行冷却。室温下采用百分之三H2O2孵育10 min，PBS 液振荡清洗3 min（重复3次），将CD44/CD166羊抗人抗体采用1∶150的比例进行滴定，37 ℃条件下孵育2 h，完成后PBS冲洗2 min（重复3次），完成后滴加聚合物辅助剂，于37 ℃条件下孵育

20 min后PBS冲洗2 min（重复3次），完成后进行标记抗山羊辣根酶IgG多聚体滴加，37 ℃条件下孵育20 min，再进行PBS冲洗2 min冲洗（重复3次），完成后进行DAB显色，显微镜下控制染色程度，完成后流水冲洗10 min，苏木素复染2 min后予以盐酸酒精进行分化，流水冲洗10 min返蓝。最后酒精梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶进行封片。

1.4 观察指标

（1）观察两组标本组织中CD44、CD166阳性表达情况；（2）肝转移患者中CD44阳性表达与患者浸润深度、分化程度的相关性；（3）肝转移患者中CD166阳性表达与患者浸潤深度、分化程度的相关性。

1.5 阳性判定标准

（1）CD44与CD166阳性：细胞质、上皮细胞膜呈棕黄色；（2）CD44与CD166阴性：切片无阳性细胞[4]。

1.6 统计学处理

采用统计学处理软件SPSS 19.0对研究数据进行统计学处理，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组标本组织中CD44、CD166阳性表达情况

对照组和转移组CD44阳性表达率分别为42.98%和71.87%，差异有统计学意义（P<0.05）；对照组和转移组CD166阳性表达率分别为36.84%和81.25%，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 不同浸润深度、分化程度肝转移患者CD44阳性表达

结果显示，肝转移患者中CD44阳性表达与浸润深度有密切关系，肿瘤浸润深度越深其阳性表达率越高，差异有统计学意义（P<0.05）；而CD44阳性表达与分化程度无密切关联，见表2。

2.3 不同浸润深度、分化程度肝转移患者CD166阳性表达

结果显示，肝转移患者中CD166阳性表达与浸润深度有密切关系，肿瘤浸润深度越深其阳性表达率越高，差异有统计学意义（P<0.05）；而CD166阳性表达与分化程度无密切关联，见表3。

3 讨论

近年来，直肠癌发病率逐年上升，并有年轻化的趋势，这与社会因素、遗传因素与饮食因素具有密切的联系[5]。直肠癌肝转移是直肠癌患者远处转移最常见的类型，并且由于直肠癌肝转移患者早期症状不明显，容易被临床和患者忽视而延误病情。临床研究显示，直肠癌患者临床确诊时肝转移率高达25%，且肝转移是严重影响患者预后的重要因素[6]。Schindl等[7]的研究中表示，直肠癌肝转移术后5年生存率仅为19.7%，并且直肠癌肝转移后患者手术切除率较低。在这种情况下，肝转移早期的诊断与相关肿瘤干细胞的检测具有重要的临床意义。

CD44为细胞表面糖基化黏附分子，广泛存在于多种细胞中，CD44基因由高度保守的19～20个外显子构成，在11号染色体短臂上，经转录后生成CD44s（标准型）或CD44v（变异型）两种蛋白，在肿瘤的发生与发展过程中CD44呈现高表达，同时在肿瘤侵袭和转移中起到促进作用[8]。CD166是一种免疫球蛋白，属于超基因家族中的一员，不仅能够与机体淋巴细胞的抗原CD6特异性结合，表现为同嗜性黏附、同型间结合，而且可以呈异嗜性黏附、异型间结合，其在肿瘤组织中呈高表达状态，而且能够调节肿瘤的生长和转移[9]。另一方面，结直肠癌肝转移过程中，肿瘤自身可分泌多种蛋白酶，可降解基底膜和细胞外基质，基底膜被降解后，可向周围组织间质迁移，经脉管进入血液、淋巴循环并逃避免疫系统的攻击，最后伴随血液循环或淋巴循环到达继发部位，于继发部位组织发生黏附，形成克隆并增生生长，继而促使微血管生成，加速转移瘤的形成[10]。在本文研究中，转移组CD44和CD166阳性表达率分别为71.87%和81.25%，均表现为高阳性表达，而未发生转移的患者中，二者阳性表达率均性对较低，结果提示，CD44和CD166高阳性表达可作为直肠癌肝转移的标志性指标。在直肠癌肝转移患者CD44和CD166的研究中，司志英等[11-12]在各自的研究中表示，CD44和CD166高阳性表达与患者性别、年龄、病程及肿瘤大小无明显关联，而与浸润深度和分化程度可能相关，为进一步证实其结论，本文对肝转移患者中CD44和CD166阳性表达与患者浸润深度、分化程度的相关性进行初步探讨，结果显示，肝转移患者中CD44和CD166阳性表达与浸润深度有密切关系，而与分化程度无密切关联。

综上所述，CD44和CD166高阳性表达可作为直肠癌肝转移的标志性指标，对直肠癌肝转移患者的早期诊断具有积极的作用，并且CD44和CD166高阳性表达与患者浸润深度有密切的关系。

参考文献

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