宫颈细胞学传统涂片与LCT液基细胞涂片的有关讨论

【摘要】目的宫颈细胞应用传统涂片巴氏法及LCT液基涂片染色后，镜下观察细胞学形态变化及细胞类型的出现等评价。方法为取得足够诊断的细胞数量定点取材，做巴氏涂片或LCT液基涂片，镜下观察结果。结果传统涂片巴氏染色片在最低8000~12000个［1］形态完好的鳞状细胞范围之上时，LCT涂片在最低5000个之上细胞范围时，病变的阳性细胞检出率高，细胞数量在40000~80000个时，对于诊断的质量绝大部分无疑义。结论传统巴氏涂片中细胞成分常多于LCT涂片，但细胞较集中不像LCT涂片那样散在和混存，易于诊断，常能进一步提示异常细胞在涂片能进一步表达。

【关键词】传统涂片法；LCT液基细胞涂片法

【Abstract】Objectivecervical Pap smears using conventional methods and LCT stained liquidbased smears, cytology morphological changes were observed the emergence of other cell types and evaluation To obtain adequate diagnostic Methodsfor fixed number of cells drawn, do a Pap smear or liquidbased LCT smear microscopy results Conventional Papanicolaou smear Resultsin the lowest 8000~12000 a piece ［1］ form well above the range of squamous cells, LCT smear at least 5000 cells on top of the range, the lesion detection rate of positive cells, cell number 4000080000 a time, for the diagnosis of the quality of the vast majority of the doubt Conclusiontraditional Pap smear smear cell components often than LCT, LCT, but not a higher concentration of cells scattered in the smear and mix as deposit, easytodiagnosis can often be further prompted to abnormal cells in the smear can be further expressed.

【Key words】traditional smear; LCT liquidbased cytology smear

作者单位：519000广东中山大学附属第五医院病理科子宫颈细胞学涂片取材、制片及染色的质量，决定诊断的准确性。要求制片需取得足够诊断的细胞数量，才能做出正确的评价，因此，必须正确理解传统涂片的制片方法与LCT液基涂片的制片方法的优缺点，进行选择使用，同时严格规范两种制片方法的操作［13］。

1材料与方法

11材料妇科普查涂片标本，妇科患者阴道脱落细胞取材标本，巴氏染液，液基细胞保存瓶，离心机，真空泵，微型混合仪，染色槽，苏木素染液，EA/OG染液，盖玻片，中性树胶。

12方法

121巴氏染色法①将固定后涂片置入水中3~5 min，取出放入哈瑞氏苏木素液3~5 min。②再用自来水冲洗2~3次。用025%的盐酸水溶液冲洗1~3次，自来水冲洗。氨水返蓝为止。③橘黄G6液浸染1 min左右，再放入95%乙醇Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ液中各1 min。④EA36液浸液3~5 min，95%乙醇Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ液中各1 min。⑤100%乙醇Ⅰ、Ⅱ各1 min。⑥取出用电吹风吹干，中性树胶封片。

122巴氏涂片染色配制方法

1221哈瑞氏苏木素［4］甲液：苏木素5 g，100%乙醇10 ml；乙液：硫酸铝钾20 g，蒸馏水200 ml，氧化汞05 g；将苏木素溶于纯酒精中，再将钾明矾溶于蒸馏水中，加温待钾明矾全部溶解。此后将苏木素酒精溶液与溶解的钾明矾溶液混膈，煮沸之后远离明火，再将氧化汞慢慢加入上液中，用玻璃棒搅拌。再放到明火上煮少许，即将烧杯中配好的苏木素液放入流动的冷水中，使之迅速冷却，隔日过滤。使用时再加醋酸4 ml，可加强染色力。

1222橘黄G6液橘黄G6液05 g溶于5 ml蒸馏水中，溶解后加入无水乙醇至100 ml。

1223EA36溶液配制为三种染料配合而成。原液：A亮绿：05 g，溶在5 ml蒸馏水中，溶解后加入无水乙醇至100 ml。(亮绿也可用苯胺兰代替，效果相同)；B伊红：05 g溶于5 ml蒸馏水中，溶解后加入无水乙醇至100 ml。C俾士麦棕：10 ml。A、B、C三种原液混合后，把磷钨酸02 g溶于少许蒸馏水中，加入到混合液中，然后再加碳酸锂饱和溶液一滴。此液为EA36工作液。

123LCT液基涂片法①临床医生取材，用一次性宫颈取样刷，力度适中推向宫颈，顺时方向刷3~5圈，将刷头放入细胞保存液中。②振荡标本瓶1 min，在干净的玻片上涂上细胞粘附剂，自然干燥。③用注射器取4 ml的细胞分离提取液加入离心管中，离心1100转，离心力200 g，2 min，用真空泵把离心管上的上清液吸去。④离心2214转，离心力800 g，10 min，弃上清液，取出离心管放微型旋涡混合仪上振荡，静止10 min。⑤视离心管中的细胞含量多少加入400~600 ml的PBS缓冲液稀释。⑥取稀释后的细胞液放到涂有细胞粘附剂的玻片中，放到染色槽内。静置5 min，弃去染色槽内的液体标本。⑦加无水乙醇于染色槽内固定涂片上细胞1 min后弃去。在加入PBS缓冲液于染色槽内2次，各1 min，弃去。⑧加入苏木素染色剂2 min后，取出。⑨加入无水乙醇2次各1 min后，取出。⑩加入PBS缓冲液于染色槽内2次各式各1 min，取出。加EA/OG染色剂6 min，取出。加无水乙醇3次各1 min后，取出。取下玻片放到染色架上用无水乙醇2次脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

2结果

传统涂片用巴氏染色法：细胞核细微结构清晰，能辨认染色质的模式，细胞质透明多彩，质感细腻，显示细胞分化和角化程度都在液基片中易突出或发现的“问题细胞”。

LCT液基涂片法：涂片薄，均匀一致，涂片颜色清晰，背景干净，细胞质透明，有效诊断细胞充足，制片后保存时间长。

3讨论

传统涂片常受取材因素的限制，部分涂片的质量会受到影响。如果传统涂片取材正确，涂片操作符合要求，且细胞量多，加之染色合格，一般认为，在阅片方面传统涂片优于机制涂片。目前一些商家宣传液基细胞技术时缺乏科学的态度，贬低传统涂片的质量问题，引起认为传统涂片是否过时的讨论。实际上传统涂片大有可为，经典的最好的染色方法是巴氏染色法。常规涂片具有明显的优点，如简单、成本低、易学，任何实验室都可做。在诊断中涂片的背景也有助于诊断，如血性背景、脏的背景伴有高度病变强烈提示为浸润癌病变。由于腺细胞的排列结构特点保存完整，利于腺细胞肿瘤病变的早期发现。传统涂片中细胞成分常多于液基细胞片，同时，传统常规涂片保持形态较好，有问题细胞较集中，不像液基涂片那样散在和混存，易于诊断，也容易提示进一步寻找异常细胞。其缺点是采用试剂较多，步骤繁琐，如不严格按每个步骤的要求进行操作，细胞核、细胞浆着色受影响，影响诊断。LCT液基细胞片从取材到阅片的严格规范和要求，从而使得其阳性检出率得以提高，均匀分布，结构清晰，背景干净，粘液与炎细胞量少，缩短阅片时间。但是涂片的细胞不在同一平面，观察时需不断调动微调、染色有着色不佳的缺点，不易拍出清晰而具有大集中的细胞群体图像，耗材贵。对于有每次处理大批标本的医院，可节约人力。科室标本量少，不应盲目引进LCT液基细胞项目。我认为传统的巴氏染色法仍然是最经典的宫颈细胞学涂片染色方法。因此在考虑大众的健康与经济问题时，必须采用适宜的技术，把一些经济实用技术广泛引用到贫困人群的疾病筛查中是适合国情的。

参考文献

［1］马博文.子宫颈细胞病理学诊断图谱.人民军医出版社,2008：2735.

［2］曹跃华，杨敏，陈隆文,等.细胞病理学诊断图谱及实验技术.北京：科学技术出版社，2009:416426.

［3］叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程.南京：东南大学出版社，2006：325326.

［4］王伯沄，李玉松，黄高昇，等.染色的基本原理、生物染料和苏木素伊红染色方法.病理学技术，2000:132.

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