VEGF和p33ING1与食管癌生物学行为的关系

摘 要 目的:研究VEGF和p33ING1蛋白表达与食管癌临床特征之间的关系。方法:采用免疫组化法检测65例食管癌患者手术切除的组织和癌周正常组VEGF和p33ING1表达水平。结果:VEGF在正常组织中呈低表达,在肿瘤组织中呈高表达,两者比较差异有统计学意义(P<001)。p33ING1在正常组织中呈高表达,在肿瘤组织中呈低表达,两者比较差异有统计学意义(P<005)。VEGF蛋白表达水平与食管癌浆膜浸润、TNM分期、淋巴结转移、5年生存率有关(P<005),p33ING1蛋白表达水平与食管癌浆膜浸润、TNM分期、淋巴结转移、5年生存率有关(P<005)。结论:VEGF与p33ING1的表达和食管癌生物学行为有关,同时进行VEGF与p33ING1免疫组化法检测对食管癌患者病情判断和预后评价有一定的临床意义。

关键词 血管内皮生长因子 p33ING1 食管癌

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.17.169

资料与方法

1999年1月～2008年12月收集食管癌组织标本65例,在研究中将肿瘤分成两个组织学亚型:分化程度较好的鳞状细胞癌(Ⅰ级),分化程度较差鳞状细胞癌(Ⅱ级和Ⅲ级)。

方法:采用免疫组织化学SP法,鼠抗人p33ING1单克隆抗体(工作浓度1:100)用PBS代替一抗作阴性对照,以鼠脑组织做阳性对照。鼠抗人VEGF单克隆抗体(工作浓度1:100),用PBS代替一抗作阴性对照,公司提供阳性对照。组织用10%的中性甲醛溶液固定,常规石蜡包埋、切片,切片厚4靘。切片脱蜡、水化。高压锅修复法进行抗原修复(pH610),柠檬酸缓冲液水浴加热至95～99℃,放入切片喷气3分钟,然后室温下静置20分钟,取出切片,PBS冲洗,待用。余步骤按说明书进行。

结 果

VEGF和p33ING1蛋白在食管癌组织与癌旁组织中的表达情况:VEGF蛋白在食管癌组织中的阳性表达率492%(32/65)(见图1),在癌旁正常组织中的阳性表达率000%,两者比较差异有统计学意义(P<001);p33ING1蛋白在食管癌组织中的阳性表达率539%(35/65),在癌旁正常组织中的阳性表达率931%(61/65),两者比较差异有统计学意义(X2=403,P<001)。

VEGF蛋白在食管癌组织中的表达与临床病理因素之间关系,结果表明,VEGF蛋白表达水平与食管癌浆膜浸润、TNM 分期、淋巴结转移有关(P<005)。

P33ING1蛋白在食管癌组织中的表达与临床病理因素之间关系结果表明,p33ING1蛋白表达水平与食管癌浆膜浸润、TNM分期、淋巴结转移有关(P<005)。

VEGF和p33ING1蛋白表达与食管癌患者预后的关系:65例食管癌患者中有随访资料的59例,5年生存率:Ⅰ期为827%,Ⅱ期为518%,Ⅲ期为137%,Ⅳ期为13%。VEGF表达阴性的患者5年生存率明显高于VEGF表达阳性的患者,两者比较差异有统计学意义(P<001),前者为 634%,后者为312%。p33ING1表达阳性的患者5年生存率明显高于p33ING1表达阴性的患者,两者比较差异有统计学意义(X2= 146,P<001),前者为656%,后者为376%。

图1 食管鳞状细胞癌中VEGF阳性表达(SP×10)

图2 食管鳞状细胞癌中p33ING1阳性表达(SP×10)

讨 论

血管内皮生长因子(VEGF)是目前发现的最有意义的血管生长因子,它与肿瘤患者预后的关系是近几年的肿瘤研究热点,p33ING1是新近克隆出来的一种抑癌基因,在人类许多肿瘤组织中发现存在p33ING1表达降低,并参与部分肿瘤的演进过程。

VEGF是从牛垂体滤泡细胞培养液中分离出的一种高度特异性促血管内皮细胞有丝分裂的生长因子,是目前发现的最强烈的血管通透性因子, VEGF是肿瘤新生血管生长的一个重要调控因子,它不仅为肿瘤细胞生长提供营养物质,而且为肿瘤的转移提供条件。Garkavtesev等^[1]采用cDNA消减杂交法建立了一种从富含所需序列的cDNA文库中构建较简便GSEs文库的方法,并结合体内选择技术,成功克隆出一个新基因,用该基因cDNA片段反向插入表达载体并转染小鼠永生化乳腺上皮细胞后,接种于裸鼠皮下可以成瘤;体外软琼脂集落形成试验,集落数至少是对照组50倍。所有这些结果都提示,这个基因在正常情况下对细胞的生长具有抑制作用;用反义mRNA可以阻断其作用,进细胞的生长和恶性转化,因而命名为生长抑制基因(ING),并且由于这个基因可能是该家族的第一个成员,故而称之为ING1。P33ING1蛋白质的高表达可抑制细胞生长增殖,使细胞停滞于G0/G1期,并有促进细胞凋亡的作用。而p33ING1蛋白质表达下调,则可促进细胞的恶性转化,导致肿瘤的发生。祝峙等^[2]用免疫组化法检测57例肝癌及癌周边正常肝组织中p33ING1蛋白,证实在肝癌组织中p33ING1白表达明显低于正常肝组织;我们结果表明,p33ING1在食管癌的肿瘤组织中的表达强度明显减低,且在肿瘤组织中p33ING1蛋白表达强度与肿瘤浆膜浸润、TNM分期、淋巴结转移、5年生存率等呈相关性,VEGF和p33ING1蛋白表达与食管癌的侵袭性生长特性有关。

参考文献

1 Garkavtsev I,KazarovA,GudkovA,et al.Suppression of the novel growth inhibitor p33 ING1 promotes neoplastic transformation.Nat Genet,1996,14(4):415-420.

2 祝峙,林静,曲建慧,等.原发性肝细胞癌中p33(ING1b)与p53基因间协同功能的研究.中华医学杂志,2003,83(20):1795-1800.

推荐访问:食管癌 生物学 关系 VEGF p33ING1