通腑泻肺法对ALI/ARDS大鼠血清炎症因子表达的影响

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[摘要] 目的 观察通腑泻肺法对ALI/ARDS大鼠血清炎症因子的影响，探讨ALI/ARDS肺肠同治的生物学基础。方法 将100只健康Wistar大鼠随机分为5组：空白对照组、模型组、治肺组、治肠组和肺肠同治组，采用尾静脉注射油酸加内毒素方法造成大鼠ALI/ARDS模型，观察大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量。结果 通腑泻肺法可以有效降低大鼠全身炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10表达水平。 结论 （1）通腑泻肺法能够明显减轻ALI/ARDS大鼠免疫炎症损伤，其保护作用较单纯用泻肺法或通腑法效果更有优势；（2）泻肺法、通腑法和通腑泻肺法对ALI/ARDS大鼠血清炎性因子作用靶点不同。

[关键词] 通腑泻肺法；ALI/ARDS；炎症因子

[中图分类号] R259；R563.8[文献标识码] A[文章编号] 2095-0616（2011）01-26-02

The Effect of Tongfu Xiefei-therapy on the Expression of Serum Inflammatory Factors in ALI/ARDS Rats

LIU EnshunSU jingshenSUN ZengtaoGUAN PengMENG Miaomiao

The Second Affiliated Hospital of Tianjin Medical University, Tianjin 300150, China

[Abstract] Objective To observe the effect of Tongfu Xiefei-therapy on ALI/ARDS rats" autoimmune inflammatory damage and investigate the biological basis of treating the lung and the large intestine at the same time. Methods We divided 100 healthy wistar rats into 5 groups：control group，model group，lung treatment group，large intestine treatment group and lung-large intestine treatment group.We made the ALI/ARDS-rat model by intravenous injection of oleic acid plus endotoxin in caudal vein，and observed TNF-α，IL-1β，IL-6，IL-10 in serum. Results Tongfu Xiefei-therapy could effectively reduce the expression of TNF-α， IL-1β，IL-6，IL-10 in sernm of ALI/ARDS rats. Conclusion（1）Tongfu Xiefei-therapy could effectively reduce autoimmune inflammatory in ALI/ARDS rats，and the combination method was superior than either single method of Xiefei therapy or Tongfu therapy；（2）The action targets of Xiefei therapy，Tongfu therapy and Tongfu Xiefei-therapy on inflammatory cytokines in ALI/ARDS rats serum were different.

[Key words] Tongfu Xiefei-therapy；ALI/ARDS；Inflammatory cytokine

急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是指由心源性以外的各种肺内外致病因素导致的急性、进行性缺氧性呼吸衰竭[1]，严重威胁着患病人群的生命安全。ARDS的病理基础是由多种炎症细胞介导的肺脏局部炎症反应和炎症反应失控所致的肺毛细血管膜损伤。国内早在20世纪90年代初就认识到细胞因子和炎性介质调控失衡在ARDS病情的发生、发展中起着十分重要的作用[2]。ARDS不仅仅是单纯意义上的肺部疾病，也是全身系统炎性疾病的肺部表现，炎性反应和免疫调节失控导致多形核白细胞、肺泡巨噬细胞等炎性细胞激活，引起肿瘤坏死因子α、白细胞介素1、白细胞介素6、血栓素A2（TXA2）等促炎细胞因子释放，并通过细胞间的信息传导，炎性反应进一步放大，导致肺损伤加重、机体凝血/抗凝系统失衡、免疫系统受到破坏，最终诱发或加重多脏器功能障碍综合征（MODS）[3]。

ARDS的临床表现突出体现了中医“肺肠相关”的特点。因此，“肺病及肠”、“肺肠同病”是从中医视角观察ARDS的常见结论，而“脏病治腑”、“通腑泻肺”也是中医常用的有效治法并为临床研究初步证实[4，5]。本研究开展了“通腑泻肺”所代表的“脏腑同治”方案与“泻肺”“通腑”方法对ALI/ARDS大鼠血清炎症因子影响的研究，希望有助于揭示ARDS肺肠相关的炎症调控的物质基础，现汇报如下。

1材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物健康Wistar大鼠100只，雄性、体重（200±20）g，购自天津市山川红实验动物科技有限公司（许可证号：SCXK（津）2009-0001），购入后置天津中医药大学动物实验中心常规饲养。

1.1.2药物及试剂通腑泻肺方（葶苈子、桑白皮、大黄、枳实、厚朴）、通腑方（大黄、枳实、厚朴）、泻肺方（葶苈子、桑白皮）中药颗粒剂购自天津中医药大学第一附属医院药房。生药剂量比例按照文献[6]换算，依照人体单位体重生药量求得大鼠单位体重生药量。用蒸馏水配置通腑泻肺方（生药浓度1.08g/mL），通腑方（生药浓度0.45g/mL）、泻肺方（生药浓度0.63g/mL），4℃冰箱保存备用。油酸（分析纯） 天津运盛化学品有限公司；大肠杆菌内毒素脂多糖（编号：L2880，血清型055:B5）；TNF-αELISA试剂盒（批号：BP-E09117R）；IL-1βELISA试剂盒（批号：BP-E09125R）；IL-6ELISA试剂盒（批号：BP-E09726R）；IL-10ELISA试剂盒（批号：BP-E09918R）均为美国SIGMA公司产品。

1.2模型建立

动物购入后适应性饲养1周，参照文献[7]的造模方法并加以改进。将大鼠置于大鼠固定器，固定躯干及四肢，暴露尾部。正常对照组大鼠于左侧尾静脉注射生理盐水0.12mL/kg，2h后于右侧尾静脉再次注射生理盐水1mL/kg；其他各组于左侧尾静脉注射油酸0.12mL/kg，间隔2h后选右侧尾静脉注射内毒素1mg/kg复制ARDS模型。常规消毒，自由摄食饮水，注意保暖。

1.3动物分组和给药方法

将大鼠按体重随机分为五组：正常对照组、模型组、治肺组、治肠组和肺肠同治组，每组20只。空白组与模型组在造模完成后即用生理盐水灌服，每次0.01mL/g。治肺组、治肠组、肺肠同治组在造模完成后即分别采用治肺方、治肠方、通腑泻肺方灌胃，每次0.01mL/g，每日1次。

1.4标本采样和制备

分别在造模第3天和第7天每组随机抽取10只大鼠，用水合氯醛350mg/kg腹腔麻醉，仰卧固定。酒精消毒后，打开腹腔，分离腹主动脉。腹主动脉取血4mL，置于真空采血管中。3000r/min、4℃，离心10min，分离血清，-20℃分装保存。

1.5指标观测

观察各组大鼠一般状态，ELISA检测血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量，操作严格按说明书进行。

1.6统计学处理

采用SPSS13.0统计软件包，各项指标以均数±标准差（χ±s），计量资料进行ANOVA单因素方差分析，LSD法作两两比较；P＜0.05表示差异有显著意义，P＜0.01表示差异有非常显著意义。

2结果

2.1一般状态观察

正常组大鼠活泼好动，皮毛光泽发亮，呼吸平稳，抓取时能迅速逃避。模型组大鼠在注入OA后30min起，始出现精神不振，行动迟缓，对刺激反应差，皮毛枯槁，无光泽，多见皮毛倒立，蜷缩成团状；随时间延长，大鼠出现呼吸急促、呼吸困难，部分大鼠出现紫绀，血性泡沫样液体从鼻腔溢出，大便干结，部分有血尿。治肺组、治肠组和肺肠同治组大鼠精神及呼吸困难均好于模型组，能饮水，多数有黑色稀便、极臭，未见血尿；但亦行动迟缓，对刺激反应不灵敏；皮毛无光泽，但较少出现皮毛倒立。

2.2大鼠第3天血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10检测结果

与正常组相比，模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量均明显升高（P＜0.01）。与模型组相比，治肺组、治肠组及肺肠同治组大鼠血清TNF-α含量明显降低（P＜0.01），治肺组、治肠组和肺肠同治组之间无统计学差异；与模型组相比，治肠组与肺肠同治组IL-1β明显降低（P＜0.01），但二者之间无统计学差异；与模型组相比，治肺组和治肠组IL-6含量降低（P＜0.05），但二者之间无统计学差异；与模型组相比，治肠组、治肺组及肺肠同治组IL-10含量无明显降低（P＞0.05）。见表1。

2.3大鼠第7天血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10检测结果

与正常组相比，模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量均明显升高（P＜0.01）。与模型组相比，治肺组、治肠组及肺肠同治组大鼠血清TNF-α含量明显降低（P＜0.01），治肺组、治肠组和肺肠同治组之间无统计学差异；与模型组相比，治肠组与肺肠同治组IL-1β明显降低（P＜0.01），但二者之间无统计学差异；与模型组相比，治肺组IL-6含量降低（P＜0.05）；与模型组相比，治肠组、治肺组及肺肠同治组IL-10含量无明显降低（P＞0.05）。见表2。

3讨论

ALI/ARDS时，炎症介质大量产生并相互作用，形成网络，且不断循环促进，形成“瀑布样”反应，造成肠黏膜损伤并加重甚至衰竭。本研究结果显示，实验第3天与第7天，与正常组相比，模型组大鼠血清及BAL中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量均明显升高，表明造模过程启动了TNFα→IL-1→IL-6等炎性细胞因子的级联反应。

与模型组相比，治肺组、治肠组及肺肠同治组大鼠血清中TNF-α含量明显降低，治肺组、治肠组和肺肠同治组之间无统计学差异；且实验第7天，肺肠同治组TNF-α含量明显低于治肺组和治肠组，但治肺组和治肠组之间无明显差异；提示泻肺、通腑与通腑泻肺的方法均可有效的抑制ARDS发生时机体产生的炎症反应，从而起到减轻炎症性组织功能的损伤，其中以肺肠同治方法效果最好。实验第3天，与模型组相比，治肠组血清IL-1β、IL-6明显降低；肺肠同治组IL-1β明显降低；治肺组IL-6含量降低。实验第7天，与模型组相比，治肠组与肺肠同治组血清IL-1β明显降低（P＜0.01）；治肺组IL-6含量降低（P＜0.05）。提示通腑方法的使用较泻肺及通腑泻肺的方法在抑制TNF-α引起的炎症级联反应的下游炎症反应中具有较全面的效果。

TNF-α作为一种细胞因子，主要由巨噬细胞产生，在机体受到致病因素作用后，产生最快，到达高峰的时间亦最早，TNFα→IL-1→IL-6是细胞因子级联反应的基本过程。从上述数据可以推断，在抑制炎症反应中，不同治法的作用机制不同，通腑治法的作用靶点在TNF-α和IL-1β，泻肺法的作用靶点在TNF-α和IL-6。

[参考文献]

[1] 中华医学会呼吸病学分会. 急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的诊断标准（草案）[J]. 中华结核和呼吸杂志，2000，23：203.

[2] 毛宝龄. 急性肺损伤的新概念[J]. 中华结核和呼吸杂志，1996，19（4）：195.

[3] 刘又宁. 对成人呼吸窘迫综合征诊断问题的几点认识[J]. 中华结核和呼吸杂志，2000，23（4）：199-200.

[4] 李文放，陈杰. 大黄对急性呼吸窘迫综合征患者的临床疗效观察[J]. 中国急救医学，2003，23（2）：102.

[5] 耿耘，马超英. 中西医结合治疗呼吸窘迫综合征临床观察[J]. 江西中医学院学报，1997，9（1）：4-5.

[6] 柯雪帆，赵章忠，张玉萍，等. 《伤寒论》和《金匮要略》中的药物剂量问题[J].中国中药杂志，1983，8（12）：36-38.

[7] 张青，毛宝龄. 油酸和内毒素两次打击大鼠急性肺损伤动物模型研究[J]. 第三军医大学学报，2000，22（6）：603-604.

（收稿日期：2010-12-15）

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