基因扩增检测领域的食品检测实验室认可应用研究

摘要：检测和校准实验室认可准则，包含了食品检测实验室为证明其按质量管理体系运行、具有全部技术能力并能提供正确技术测试结果所必须满足的全部要求。基因扩增是指以扩增检测DNA或RNA为方法的检测技术，适用于从事基因扩增检测领域食品质量检测类相关实验室的认可活动。从实验室和人员情况、管理体系、服务和供应品性能的技术要求、客户服务等方面阐述了管理要求，从人员情况、设施与环境条件、检验方法和数据控制、仪器和设备、测量的溯源性、测试及校准物品的处置、技术结果的质量保证和报告等方面阐述了技术要求。

关键词：基因扩增检测；检测和校准实验室；实验室认可

中图分类号：TS201 文献标志码：A doi：10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.06.022

Study on the Application of Laboratory Competence Accreditation for

Food Inspection in the Field of Gene Amplification Testing

LI Hong1，2，DENG Liuai3，HAN Ziqiang4，LI Yanmei1，*LIU Yunguo1

（1. Xinjiang University，Urumqi，Xinjiang 830046，China；2. China National Accreditation Center for Conformity Assessment，Beijing 100062，China；3. Rizhao Food & Drugs Inspection & Testing Center，Rizhao，

Shandong 276800，China；4. Pingyin Vocational Education Center，Pingyin，Shandong 250400，China）

Abstract：The testing and calibration laboratory accreditation standards include all requirements that met for food inspection laboratories to demonstrate their ability to operate and provide the correct technical results in accordance with the management system. Gene amplification refers to the detection of DNA or RNA as a method of detection. This study is applicable to the accreditation activities of food inspection laboratory in the field of gene amplification testing. The management requirements are elaborated from laboratory and personnel，management system，service performance and the technical requirements for the supplies and customer service. The technical requirements are elaborated from requirements of the personnel，facilities and environmental conditions，detection method and data control，instrument and equipment，measurement traceability，test and calibration items of disposal，and the results of the quality assurance reporting.

Key words：gene amplification testing；testing and calibration laboratory；laboratory competence accreditation

基因擴增是指通过生物体外试验的方法，将一特定基因的拷贝数选择性地增加而其他基因并未按比例增加的过程，即以扩增检测DNA或RNA为方法的检测技术，不包括自然基因扩增。检测和校准实验室能力认可准则，包含了检验和校准实验室为证明其按质量管理体系运行、具有全部技术能力并能提供正确技术检测结果所必须满足的所有要求[1]。研究适用于从事基因扩增检测领域的食品质量检测实验室的认可活动，因扩增方法主要用于转基因检测、动植物源性成分鉴定、过敏原检测、物种分子鉴定、微生物鉴定、功能基因检测等，该领域涉及植物学、动物学、微生物学、病毒学、人类学、古生物学、藻类学、昆虫学等。

1 管理方面的要求

1.1 实验室及人员要求

食品质量检测实验室不得从事法律法规禁止的一切活动，包括不允许发布在国家法律法规禁止范围内的检验结果，有责任和义务保护我们国家的物种信息资源和基因资源，应确保样本及其相关的基因、遗传信息不被用于鉴定及客户委托以外的其他目的使用。食品质量检测实验室技术管理者中应至少包括1名具有丰富的基因扩增检测经验和相关知识的人员，应具有分子生物学专业或与所从事检验专业范围密切相关的大学本科以上学历和至少5年以上分子生物学检测的工作经历。

1.2 管理体系

针对基因扩增检测领域的基础性和前瞻性，应建立与其活动范围相适应的管理体系。应制定程序来描述如何更改和控制保存在计算机系统中的文件，尤其是结果的处理软件。标书和合同的评审对包括所使用方法在内的要求应予以规定，并充分考虑国家法律法规及社会伦理道德的要求[2-3]形成文件，并被人们易于理解；使用时，应包括客户的要求或标书与合同之间任何差异、任何变化的动态管理。基因扩增领域具有探索性，在实际检测工作中经常根据前期的检测结果确定下一步的检测工作，由于合同处于变化过程中，因而对合同要实施动态管理。食品质量检测实验室应根据客户样品的信息，如样品类型及样品的处理程度，确定此技术在样本中的适用性。当核酸提取或基因扩增无法完成、无法出具结果报告时，应向客户做出说明。如基因扩增后需要进行测序，该测序工作可以优先分包给已获认可的权威或专业技术机构来进行。

1.3 服务和供应品性能的技术要求

应制订实验验证的文件，包括分子生物学试剂、染料、培养基、血清、抗血清和分析软件等符合预期性能；尤其要对影响结果质量的重要供应品、试剂和消耗性材料进行技术性验收[4-5]。用于基因扩增前处理的试剂，应为不含干扰检测结果成分的分析纯或生化试剂，使用时提取缓冲液或溶液使用前应采用适当方式灭菌，应遵循前处理的注意事项或试剂的使用说明（包括试剂对声、光、热及化学物质的稳定性信息）并形成相应记录。食品质量检测实验室配制的试剂应贴好标签，并在标签上注明试剂名称、容量、溶剂类型、配制及使用日期和/或保质期，若试剂有特殊使用说明、有毒有害提示或使用限制也应在标签上注明。所用Taq聚合酶/反应预混液/试剂盒/引物和探针，在使用前应进行性能验证。引物应通过核酸阳性物质及阴性物质验证其性能，并出具证明证实引物的性质或序列。实验室应优先使用已经获得产品认证或者质量管理体系认证的合格供应商提供的产品；检验机构也可以通过调查或实地考察方式进行供应商的评价，证明供应商的组织能力和技术能力，并保存对其进行评价的相关记录[6]。

1.4 客户服务

食品质量检测实验室在确保其他客户信息机密的前提下，允许客户或其代表合理进入检测机构的相关区域，还应考虑法律法规、样品安全、人身安全、污染防范等多方面因素[7-8]。实验室应制定污染处理文件，污染一旦发生，应立即停止检验工作，并立即评价是否对检验结果造成了不良影响；应确保所有检验人员能够识别污染的发生，并执行工作程序；应有程序确保电子记录的安全性和完整性，并定期进行备份和杀毒处理；授权专门人员负责电子记录的保存、使用、传输、审核以及维护等。

2 技术方面的要求

2.1 人员要求

食品质量检测实验室选用工作人员时，应考虑以下几个条件：①应该熟悉生物检验安全和消毒灭菌知识；②应获得与其检测工作内容相适应的培训，具备相应的实验操作技能；③当检验实验室使用分析软件、数据库软件或在线软件对检测的结果进行检索和处理时，检验报告中所含意见和解释负责的人员必须对相关软件性能及操作等有充分的了解[9]。所有专业技术人员应有相关专业的教育经历；授权签字人应具有相关专业本科以上学历，且在本专业领域工作5年以上或者经评估具有同等学历。同等学历的规定如下：博士学位研究生毕业，从事相关专业检验工作不低于1年；硕士学位研究生毕业，从事相关专业检验工作不低于3年；大学本科毕业，从事相关专业检验工作不低于5年；大学专科毕业，从事相关专业检验工作不低于8年可视为具有同等能力。应对工作人员定期进行持续技能培训和重新确认，并提供记录。例如，每12个月至少进行1次技能确认，在1个认可周期内，对主要检测和技术管理人员的确认内容应覆盖其所从事技术工作的全部内容。当检验人员或授权签字人的职责变更或离开岗位6个月以上再重新上岗时，应重新予以考核确认[1]。

2.2 设施及环境条件

在设施方面，食品质量检测实验室内温度、湿度的控制应能满足仪器设备的正常运行和不同试验的需求。对检测实验室设施的要求，是以能获得可靠的检验结果为重要依据。检测实验室的总体布局和各分支部位排列应减少潜在对检测样本的污染和对人员的危害，应设分割开的工作区域，至少包括以下区域：①试剂储存、准备和配制区；②样品準备区；③核酸提取区；④扩增区；⑤扩增产物的分析区[10-11]。各功能区域的使用面积要能够保证合理放置仪器设备和符合相应检测业务工作的需求，功能区之间实现有效间隔。各功能区域应该有明确的标识，以避免不同工作区域内的设备、试剂及物品等混用。如有必要，应实现样品在工作区域之间单向流动。出入各工作区域必须遵循单一的方向顺序，即只能从试剂储存及准备和配制区、样品准备区、扩增区至扩增产物分析区，避免相互之间发生交叉污染。在不同的工作区域作业时，应使用有明显区别标志的工作服，以防止混用。此外，当实验人员离开工作区域时，不得将各区域特定的工作服带到另外区域。

在环境条件方面，食品质量检测实验室的清洁、清洗等应按试剂储存及准备和配制区再到扩增产物分析区的单一方向进行。不同的作业区域应有其各自的清洁工具，不能混用，以防止相互间交叉污 染[12]。实验室应有限制进入的措施，应控制非作业人员进入或使用可能会影响检验质量的区域。应采取适当的方式保护检测样品及环境，防止未经授权的人员访问。必要时，应为进入检测实验室的人员提供至少1套有效的生物安全防护工具。实验室应有妥善处理废弃样品和有害废弃物的设施及制度，如使用某些可致基因突变和（或）有毒物质（如甲醛、丙烯酰胺、溴化乙锭或同位素等），应注意操作人员的安全防护。

2.3 检测方法及数据控制

食品质量检测实验室应明确检测方法的适用范围，如有些转基因检测方法规定样品只能是未加工的或者进行了加工但未污染其他物种DNA的样品，实验室用此方法进行认可时应该充分认识到这些限制[13]。必要时，操作指导书应规定检测结果的判定方法、判定依据、判定结果等的表述，包括对过程产物的确认要求。实验室应建立并实施数据保护的程序，对数据输入或采集、数据存储、数据转移和数据处理的方法、备份方式、数量和时间、杀毒方式进行规定，并定期核查，以确保数据的真实性、完整性、保密性和安全性。同时，实验室应将以图像形式（如电泳图）保存的数据资料纳入到数据保护程序中。

2.4 儀器和设备

对于没有设定检定规程的仪器和设备，食品质量检测实验室应建立用于定期检验并证实该设备经过了适当校准且处于正常功能状态的程序和记录，建立1套定期预防性维护程序和应急预案[14]。该程序应遵循仪器制造商的建议，可根据制造商的仪器设备使用说明确定维护、验证、可接受标准、校准的频次和程序。基因扩增检验实验室每一区域都须有专用的仪器和设备，各区域仪器和设备都必须有非常明确的标识，以避免设备物品（如试剂、吸管、微量移液器等）从其各自的区域内移出，造成不同工作区域间的交叉污染[15]。微量移液器要定期进行期间核查，以保证容积的准确。

2.5 测量溯源性

基因识别结果或鉴定结果，可溯源至公认的基因序列。基因扩增检测无法溯源到SI单位或与之无关，要求能溯源到标准物质、使用规定的方法和或被有关各方接受并且描述清晰的协议标准、核酸序列，包括参加能力验证[16]。如无可参加的能力验证时，则尽可能参加3家以上实验室间比对计划。基因扩增领域标准物质可包括目标生物（微生物、病毒、寄生虫、转基因品系等）、阳性DNA参考物质、质粒或载体、公共的基因序列数据库（如生命条码数据系统（BOLD）和美国国立生物技术信息中心（NCBI）的参考DNA序列等。检验过程中的阳性对照、阴性对照、对照标本的使用和储存，应参照标准物质的管理方法进行管理[17]。

2.6 测试和校准物品的处置

食品质量检测实验室应根据检验项目制定样品的接收条件，明确提出对样品的要求，列出不符合要求样品的类型和拒收条件。在接收检材或样本时，应对其来源、名称、数量及性状进行详细的审查，如发现有异常情况，或与被告知的情况或提供的说明不符时，应及时向委托方问询、核实，做好记录并由委托方签字确认。针对物种鉴定方面，样品的物理特性（包括外观、气味、纹理等）可能有助于识别样品的物种来源，应在DNA测试之前进行这些检测，且应记录所有相关的信息[18]。如果物理特性的分析结果与声称的物种不匹配，实验室应要求客户说明原因。由于检测目的不同，样本会被分装或转移。因此，实验室应提供操作手册及相应程序规定过程或中间样品的保存和使用要求，如从样本中提取的核酸、基因扩增反应产物等中间样品的保存和使用。

2.7 检测结果的质量保证和报告

食品质量检验实验室应制订质量控制计划，对内部质量控制和外部质量控制活动的实施方式、内容、责任人等作出明确的规定；对内部质量控制活动，质量控制计划中还应给出结果评价依据。在1个认可周期内，无论内部还是外部质量控制活动，其实施的内容应覆盖到获得认可的全部检测项目和所有的关键检验人员。针对样品掺假检测，如果检测方法中给出了检出限，则无论结果是“检出”还是“未检出”，在报告中均应注明方法的检出限。

针对转基因检测，报告中应详细给出靶序列类型，如“35S启动子：检出”或“抗草甘膦转基因：未检出”或“Bt-176：未检出”，而不应该仅仅报告“不含转基因成分”，后者的表述会造成所有转基因成分都已检测的歧义。同时，应按照标准要求给出空白对照、阴性对照和阳性对照等的检测结果。如果由于提取核酸的质量、数量不足或其他技术原因，不能得出结论，应在报告中明确指出。应有措施对检测结果和检测中获得的信息或个人隐私保密。

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