Gsm和2—Mib在斑马鱼体内的富集及暂养效果研究

材料与方法

1.1 材料

试验用斑马鱼购自中国科学院水生生物研究所，Gsm和2-Mib标品、1-氯癸烷、饱和食盐水等其他试剂均为分析纯。

7890A-5975C气质联用仪，DF-101S集热式恒温磁力搅拌器，CAR/DVB固相微萃取萃取头和手柄。

1.2 方法

1.2.1 气质联用仪条件 参照文献[9-12]，色谱柱：DB-5MS弹性毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；程序升温：柱初温30 ℃，保持2 min，以5 ℃/min升至60 ℃，保持2 min，再以10 ℃/min升温至250 ℃，保持2 min，最后以20 ℃/min升温至280 ℃，保持2 min；进样口温度250 ℃；载气流量1 mL/min；不分流；传输线温度280 ℃；离子源温度230 ℃；四极杆温度 150 ℃；电子能量 70 eV；离子质量扫描范围（m/z）45～350，设定Gsm和2-Mib的SIM定量离子。

1.2.2 标准曲线的绘制 分别取10 mL ddH2O和 3 g斑马鱼肉加入7 mL饱和食盐水溶液的混合匀浆液，再分别加入5 ng 1-氯癸烷内标和混标（Gsm和2-Mib）0.2、0.5、1、2、5、10和20 ng，将装配好的CAR/DVB萃取头插入顶空瓶中。在集热式恒温磁力搅拌器中60 ℃恒温萃取50 min，取出萃取头插入气相进样口，热解析5 min。标准曲线横坐标为Gsm和2-Mib与内标的浓度比，纵坐标为Gsm和2-Mib与内标的峰面积比。

1.2.3 添加回收率 分别取10 mL ddH2O和3 g 斑马鱼肉加入7 mL饱和食盐水溶液的混合匀浆液，再分别加入5 ng 1-氯癸烷内标和混标（Gsm和2-Mib），使水溶液中Gsm和2-Mib的终浓度分别为0.1、0.3、0.5、1.0 μg/L（每个添加浓度3个平行），将装配好的CAR/DVB萃取头插入顶空瓶中。在集热式恒温磁力搅拌器中60 ℃恒温萃取50 min，取出萃取头插入气相进样口，热解析5 min。根据标准曲线计算浓度与实际添加浓度的比值，计算添加回收率。

1.2.4 斑马鱼暴露富集试验 将4月龄斑马鱼养殖在混标浓度分别为1 μg/L和0.1 μg/L的水样中，暴露0、2、7 d后分别采集水样和鱼样，利用建立的固相微萃取-气质联用的方法测定样品中Gsm和2-Mib的浓度。

1.2.5 斑马鱼暂养试验 将暴露7 d的斑马鱼暂养在不含Gsm和2-Mib的清水中，养殖0、2、7 d分别采集水样和鱼样，利用建立的固相微萃取-气质联用的方法测定样品中Gsm和2-Mib的浓度。

2 结果与分析

2.1 方法的线性范围、检测限和添加回收率

利用混标配制范围为0.02～2.0 μg/L的系列浓度梯度，经固相微萃取富集处理后进气质分析，以信噪比S/N=3所对映的被测化合物浓度作为方法的检出限（LOD）（表1）。

添加回收率试验以Gsm和2-Mib的标准曲线为计算基础，每个添加浓度设置5个平行，水样中混标的添加终浓度分别为0.1、0.3、0.5和1.0 μg/L，斑马鱼体中混标的添加终浓度分别为0.3、0.5和1.0 μg/L。

从表2可看出，水样中不同浓度Gsm和2-Mib的添加回收率分别为97.2%～109.9%和88.5%～101.6%，并且5个平行添加浓度间的相对标准偏差均小于10%，表明建立的固相微萃取-气质联用方法重现性好，可用于实际水体样品中Gsm和2-Mib的定量检测分析。

从表3可以看出，斑马鱼样中不同浓度Gsm和2-Mib的添加回收率分别为78.5%～87.2%和88.3%～91.4%，比水样中的回收率要低，可能跟鱼样中含脂量高相关。鱼样中5个平行添加浓度间的相对标准偏差均小于10%，表明建立的固相微萃取-气质联用方法重现性好，可用于实际斑马鱼样品中Gsm和2-Mib的定量检测分析。

2.2 Gsm和2-Mib在斑马鱼体内的富集

本试验分析了暂养过程中（0、2和7 d）水体和斑马鱼体内Gsm和2-Mib的浓度变化情况。从图1和图2可以看出，水样中Gsm和2-Mib的浓度随暂养时间延长而逐渐降低，2 d内水样中Gsm和2-Mib的浓度明显下降，低浓度时水样中Gsm下降速率较2-Mib要快。

从图3和图4可以看出，斑马鱼暴露在不同浓度Gsm和2-Mib的水体中，2 d内Gsm和2-Mib会迅速富集到斑马鱼体内，并且Gsm的富集速率明显比2-Mib要快。

2.3 Gsm和2-Mib的清水暂养结果

研究了暂养对斑马鱼体内Gsm和2-Mib的去除效果，分析了暂养过程中（0、2和7 d）斑马鱼体内Gsm和2-Mib的浓度变化情况。从图5和图6可以看出，不同浓度Gsm和2-Mib暴露7 d的斑马鱼经清水暂养后，斑马鱼体内Gsm和2-Mib的浓度随暂养时间延长而逐渐降低，但去除较缓慢。

3 小结与讨论

Gsm和2-Mib两种土腥味物质已有大量研究报道，但主要是有关水体异味化合物的研究[13，14]，特别是饮用水中的含量测定和脱除方法研究，近年来已有研究人员开展鱼体内Gsm和2-Mib测定方法的研究报道，如王国超等[15]利用微波蒸馏-固相微萃取-气相色谱-质谱方法建立了罗非鱼体中Gsm和2-Mib的定量分析方法，薛勇等[16]利用微波蒸馏提取-固相微萃取富集-气质联用的方法建立了鳙鱼体内Gsm和2-Mib的定量测定方法。但利用模型鱼类研究鱼体内Gsm和2-Mib的富集和清水暂养的研究鲜有报道。

本试验利用固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术建立了水体和斑马鱼体中Gsm和2-Mib的内标定量分析方法。水样中不同浓度Gsm和2-Mib的添加回收率分别为97.2%～109.9%和88.5%～101.6%，并且5个平行添加浓度间的相对标准偏差均小于10%，检测限均为5 ng/L；斑马鱼样中不同浓度Gsm和2-Mib的添加回收率分别为78.5%～87.2%和88.3%～91.4%，鱼样中5个平行添加浓度间的相对标准偏差均小于10%，检测限分别为21.2 ng/L和11.5 ng/L；说明所建立的定量分析方法可用于实际水体和斑马鱼样品中Gsm和2-Mib的定量检测分析。鱼体中不同浓度Gsm和2-Mib的添加回收率都比水样中要低，可能跟鱼样中含脂量高从而影响Gsm和2-Mib在萃取头上的富集有关。

利用建立的方法通过暴露和清水暂养试验研究了不同浓度Gsm和2-Mib在鱼体内的富集和暂养去除效果，斑马鱼暴露在不同浓度Gsm和2-Mib的水体中，2 d内水体中Gsm和2-Mib的浓度迅速降低，斑马鱼体内的Gsm和2-Mib浓度迅速升高；然后随暴露时间的延长，水体中Gsm和2-Mib的浓度逐渐降低，斑马鱼体内Gsm和2-Mib的浓度逐渐升高，并且Gsm的富集速率明显比2-Mib要快，鱼体内异味化合物的浓度和暴露初始浓度成正相关。从而说明环境水体中的Gsm和2-Mib是鱼体产生土腥味的主要外源化合物，通过鳃和鱼体表进入鱼体富集。Gsm的富集速率和富集倍数明显比2-Mib大，这也可能是文献报道鱼体中常能检测到Gsm，而检测不到2-Mib的客观原因。

清水暂养试验结果表明，随暂养时间的延长，斑马鱼体内的Gsm和2-Mib的浓度也逐渐降低，但去除效果不明显，说明鱼体中脂溶性的Gsm和2-Mib很难仅通过清水暂养来达到好的去除效果，需结合其他去除方法方能为人们提供优质安全可接受的动物蛋白源。

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