DNA定量细胞学结合HR—HPV对宫颈病变的研究价值

摘要：目的 探讨DNA定量细胞学结合HR-HPV对宫颈病变的研究价值。方法 采取河北省唐山市人民医院妇科门诊2011年～2013年因有临床症状就诊的患者8704例，检查前3d不做阴道冲洗及阴道上药，24h内禁止性生活，并在非经期检查，对NDA检查结果异常的1008例患者作为研究对象，均需由专职医师行HPV检查及在阴道镜下做子宫颈4个点位活检，进行病理组织学诊断，然后登记、分类、统计、分析。结果 宫颈细胞样本诊断结果：NILM：7398例（85.00%）；异常：1306例（15.00%）：包括（ASCUS）：636例（7.31%），LSIL：520例（5.97%），HSIL：126例（9.65%），SCC：24例（0.28%）。DNA定量分析系统检查发现1576例（18.13%）为异常，包括416例1～2个DNA指数（DI）≧2.5的细胞，310例增生细胞数在5%～10%之间的细胞，626例3个或3个以上DNA指数（DI）≧2.5的细胞，104例具有异倍体细胞峰的细胞，120例增生细胞数〉10%的细胞。HR-HPV感染病例2689例，占30.89%（2689/8704）。1780例行阴道镜及活检，有1354例为低级别及以上病变，其余426例为无上皮内病变或慢性子宫颈炎。以根据TCT结果ASCUS及以上合并HR-HPV感染行活检的病例阳性检出率为72.22%（871/1206），根据DNA指数（DI）≧2.5的细胞合并HR-HPV感染行活检的病例阳性检出率为81.44%（1128/1385）。结论 HR-HPV感染可能导致DNA异倍体的出现，细胞核DNA倍体分析和HPV检查结果又均与病变的程度密切相关，二者联合可为疾病的筛查、预后的判断提供更多有价值的资料。用于ASCUS分流的诊断，避免过多的阴道镜活检。

关键词：DNA定量细胞学；全自动DNA倍体分析系统；宫颈癌；高危型人乳头瘤病毒；细胞图像分析

宫颈癌，是发生于子宫颈上皮的恶性肿瘤。近10年来，宫颈癌发病率逐年上升且预后更差的腺癌发生率有所上升，并趋于年青化，已引起人们的广泛重视。国际医学权威证实宫颈癌是感染性疾病、可预防的疾病，也是世界目前唯一可以早期发现并治愈的癌症。

1 资料与方法

1.1一般资料 河北省唐山市人民医院妇科门诊2011年～2013年因有临床症状就诊的患者中自愿行宫颈DNA筛查及HPV检查者8704例，年龄24～69岁，临床表现多为白带增多、宫颈糜烂、性交出血、不明原因的阴道流血及外阴赘生物等症状。检查前3d不做阴道冲洗及阴道上药，24h内禁止性生活，并在非经期检查，对NDA检查结果异常的1008例患者作为研究对象，均需由专职医师行HPV检查及在阴道镜下做子宫颈4个点位活检，进行病理组织学诊断，然后登记、分类、统计、分析。

1.2方法 HPV基因分型检测试剂盒操步骤：通过提取临床样本病毒DNA，经过PCR扩增，利用导流杂交平台，在已经固定好核酸探针的低密度基因芯片上杂交、显色，诊断脱落细胞标本中的21种HPV病毒DNA分子的存在。一次取样就可以检测出患者是否感染21种HPV病毒，并能够精确知道患者感染的是何种HPV病毒，从而确定患者感染病毒的危险性。

1.3阴道镜检查与活检 使用PL-9800 电子阴道镜，由阴道镜专科医师进行检查，对可疑病灶阴道镜下定位活检；若镜下未发现异常或图像不满意，则取宫颈多点活检或行颈管搔刮术。所有活检标本由我院经验丰富的病理医师阅片及作出最后诊断。

1.4统计处理 采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析，计数资料采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1液基薄层涂片结果 采用液基薄层涂片技术，应用2004版TBS细胞学分级对8704例宫颈细胞样本诊断结果：NILM：7398例（85.00%）；异常：1306例（15.00%）：包括（ASCUS）：636例（7.31%），LSIL：520例（5.97%），HSIL：126例（9.65%），SCC：24例（0.28%）。

2.2 DNA定量分析系统检查结果 DNA定量分析系统检查发现1576例（18.13%）为异常，包括416例1-2个DNA指数（DI）≧2.5的细胞，310例增生细胞数在5%～10%之间的细胞，626例3个或3个以上DNA指数（DI）≧2.5的细胞，104例具有异倍体细胞峰的细胞，120例增生细胞数〉10%的细胞。

2.3 HR-HPV检测结果 8704例进行了HPV检测，其中HR-HPV感染病例2689例，占30.89%（2689/8704）。

2.4 组织学诊断结果 根据TCT结果ASCUS及以上、DNA指数（DI）≧2.5的细胞合并HR-HPV感染经建议取活检后，1780例行阴道镜及活检，经病理活检证实，有1354例为低级别及以上病变，其余426例为无上皮内病变或慢性子宫颈炎。以根据TCT结果ASCUS及以上合并HR-HPV感染行活检的病例阳性检出率为72.22%（871/1206），根据DNA指数（DI）≧2.5的细胞合并HR-HPV感染行活检的病例阳性检出率为81.44%（1128/1385）。

3 讨论

正常细胞（即DNA二倍体细胞，2C细胞）及肿瘤细胞在生长增殖时，细胞核内DNA结构及含量都会发生变化。DNA含量的变化可作为直接反映肿瘤增殖的重要生物学指标。通过对细胞核内DNA含量的测定及特征的分析能了解正常细胞周期变化及发现恶性增殖的肿瘤细胞。人乳头瘤病毒是一种可引起人类黏膜组织良性及恶性肿瘤的病毒。HPV在感染细胞中以二种形式存在：一种是病毒DNA游离于宿主细胞染色体外，常见于低危型HPV6、11感染，另一种是病毒DNA与宿主细胞染色体相整合，常见于高危型HPV16、18感染。在宫颈病变的筛查中，联合应用DNA定量细胞学技术和高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）检测，分析两者与临床病理因素的关系，评价DNA定量细胞学结合高危型人乳头瘤病毒检查在宫颈癌及癌前病变筛查中的价值、宫颈癌恶性程度的评估及对宫颈疾病发展趋向的预测价值。

综上所述，三种方法单独使用，DNA定量分析敏感性最高，但特异性较低，TCT诊断特异性最高，但敏感性较低，HPVl6/18DNA检测敏感性和特异性均较低，说明每种方法单独使用会降低普查的效率。TCT或DNA定量分析结合HPVl6/18DNA检测都可提高敏感性。对TCT诊断为ASCUS的患者，结合HPVl6/18DNA检测或DNA定量分析进行分流是行之有效的办法。

编辑/哈涛

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